RESUMEN

Antecedentes: Desde hace más de 40 años, tanto la centrifugación diferencial como la centrifugación por gradiente de densidad son utilizadas para el aislamiento de organelos subcelulares. Sin embargo, en estas técnicas no siempre se conservan las propiedades biológicas de los organelos, por lo tanto, es necesario realizar modificaciones técnicas que permitan aislar organelos conservando sus propiedades biológicas.
Metodología: Se obtuvieron monocitos derivados a macrófagos a partir de 180 mL de sangre periférica de voluntarios sanos. Los macrófagos se infectaron con Mycobacterium tuberculosis (M. tuberculosis), homogenizaron mecánicamente y ultracentrifugaron utilizando un gradiente de Percoll al 27%. Posteriormente, el homogenizado se fraccionó manualmente de acuerdo con su densidad en 30 fracciones.
Resultados: Los organelos fueron separados de acuerdo con su densidad. La membrana plasmática con una densidad de 1.040 g/mL se localizó en las fracciones 10-14. Los fagosomas y fagolisosomas con una densidad de 1.109 g/mL se localizaron en las fracciones 22-29. La caracterización de los organelos subcelulares fue realizada mediante métodos fluorométricos específicos por la identificación de acoplamiento de biotina (membrana plasmática), identificación de fracciones conteniendo M. tuberculosis y de la enzima fagolisosomal β-hexosaminidasa.
Conclusiones: La técnica de ultracentrifugación en combinación con técnicas enzimáticas es útil para aislar y caracterizar fagosomas, fagolisosomas y membrana plasmática. Estos organelos están involucrados en el procesamiento y presentación de antígenos, su aislamiento es crucial para el estudio de su papel en la respuesta inmune.

PALABRAS CLAVE

Organelos, fraccionamiento subcelular, ultracentrifugación, gradiente de Percoll.

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